RT-PCR試劑盒實驗請注意
瀏覽次數:578發布日期:2021-11-25
RT-PCR試劑盒反應就是從RNA反轉錄至cDNA,然后通過PCR反應擴增cDNA的過程。Super一步法RT-PCR(AMV)試劑盒采用了一步反應法完成整個RT-PCR反應,即RNA-cDNA-PCR反應操作在同一反應體系中進行,反應過程中不需增加額外的步驟,就可完成整個RT-PCR反應,同時整個反應系統且含有電泳時所需要的試劑,可直接上樣電泳。本試劑盒具有方便、簡捷、靈敏度高、重復性好的特點,可適用于各種動、植物、病毒RNA的PCR檢測。
RT-PCR試劑盒實驗請注意:
1.用戶可根據自己的情況調整優化PCR反應擴增參數:
·退火溫度:可根據實際情況適當地提高或降低退火溫度(50℃~65℃)。
·延伸時間:延伸時間因目的序列長度的不同而不同
·循環次數:cDNA量較少時,循環次數可增加為40~50次
·調整鎂離子的濃度
2.用戶可根據本試劑盒提供的β-actin引物(陽性對照)驗證RT-PCR體系是否良好(選做):
(1)使用前每個組份輕輕混勻,然后2000rpm離心20s;
(2)滅過菌且無核酸酶的0.2mlPCR管,依次加入
(3)輕混勻,2000rpm離心20s后進行RT-PCR反應;RT反應條件:42℃保溫1hr PCR擴增條件:94°C,5min;
94°C變性,30sec;
54°C退火,45s;
72°C延伸,1min;
33個循環;
72°C,10min,
(4)應結束后,取反應液10uL進行瓊脂糖凝膠電泳,確認β-actin基因目的產物片斷為359bp。
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