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小鼠晶狀體上皮細(xì)胞提取物

  • 更新時間:  2020-07-06
  • 產(chǎn)品型號:  
  • 簡單描述
  • 小鼠晶狀體上皮細(xì)胞提取物現(xiàn)貨供應(yīng),質(zhì)量有保證、*、實驗效果好,我司為您提供免費代測服務(wù),同時提供價格、說明書、規(guī)格、用途、實驗原理等相關(guān)操作說明。
詳細(xì)介紹

培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080),85%;北美胎牛血清(United States,GIBCO,貨號16000-044),15%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
1.棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,可進行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進行凍存。

小鼠晶狀體上皮細(xì)胞提取物是從小鼠原代晶狀體上皮細(xì)胞提取的,小鼠原代晶狀體上皮細(xì)胞從正常小鼠眼組織制備。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆,表達圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實驗的研究。
總RNA制備:利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。

cDNA制備:純化后的總RNA來合成cDNA鏈,以50ul總反應(yīng)體系進行逆轉(zhuǎn)錄,體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運輸cDNA,1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析,保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。

蛋白制備:利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備小鼠晶狀體上皮組織裂解液,離心去除組織碎片,通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度,組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF,-80度保存。

潛在的應(yīng)用: <1>已知基因的PCR克隆;<2>mRNA選擇性剪接;<3>基因克隆與目標(biāo)測序;<4> Western and Northern Blot;<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學(xué);<6>芯片研究與表達圖譜。

產(chǎn)品名稱

 小鼠晶狀體上皮細(xì)胞提取物

英文名稱

Mouse Eye: Normal Lens Epithelial Cells Derivatives

貨號

CS-X3701

 


細(xì)胞分類:

一種:
是凍存產(chǎn)品,由氮直液接拿出,干冰運輸給客戶。一般不推薦這種,也較少使用這種方式,因為復(fù)蘇手法對于細(xì)胞狀態(tài)影響較大,一旦細(xì)胞狀態(tài)不好,很難說是細(xì)胞自身不行,還是復(fù)蘇沒操作好;另外溫度對細(xì)胞、基因功能狀態(tài)影響很大,也不是細(xì)胞儲存的方式,快遞時間也很難控制,多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量;干冰運輸需要額外添加400元的運費(順豐)。
第二種:
是我們復(fù)蘇好細(xì)胞,QC通過后,T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運輸給客戶,排除復(fù)蘇造成影響,常溫運輸也對細(xì)胞影響也不大,只需加25元運費(順豐)。
質(zhì)量保證:我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,購買到貨后,由我們實驗室擴增、凍存,凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測,進口來源,保證5代以內(nèi),活力>95%,無細(xì)菌、真菌、支原體污染。
細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點:
1.研究的對象是活細(xì)胞
在實驗過程中,根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力,并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細(xì)胞的情況,包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件,可以根據(jù)實際需要進行人為的控制,同時,可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察,這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細(xì)胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞,需要時,可采用克隆化等方法使細(xì)胞達到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術(shù):如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。
以下是公司正在銷售的相關(guān)產(chǎn)品: 

46.875pg/ml生長分化因子15(GDF15)檢測試盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)FASTDIGEST EAM1105I

0.094ng/ml生長分化因子15(GDF15)檢測試盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)FASTDIGEST ECL136II

0.188ng/mlATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運蛋白B10(ABCB10)檢測試盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)FASTDIGEST ECOO109I

0.094ng/mlS100鈣結(jié)合蛋白(S100)檢測試盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)FASTDIGEST ECORI

0.188ng/mlS100鈣結(jié)合蛋白B(S100B)檢測試盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)FASTDIGEST ECORI

0.188ng/ml氧化還原蛋白(Trx)檢測試盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)FASTDIGEST ECO31I

0.375ng/ml凝酶原片段F1+2(F1+2)檢測試盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)FASTDIGEST ECO31I

0.469ng/ml凝因子Ⅹ(F10)檢測試盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)FASTDIGEST ECO32I

46.875pg/ml 蛋白酶激活受體2(PAR2)檢測試盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)FASTDIGEST ECO32I

0.094ng/ml清淀粉樣蛋白A(SAA)檢測試盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)FASTDIGEST ECO47I
小鼠晶狀體上皮細(xì)胞提取物絲裂原激活蛋白激酶激酶激酶激酶5(MAP4K5)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)喹(分析標(biāo)準(zhǔn)品,99.8%)

環(huán)胍氨肽(CCP)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)二氯喹啉(分析標(biāo)準(zhǔn)品,98%)

造骨細(xì)胞鈣黏蛋白(CDHOB)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)苯基三氯化錫(標(biāo)準(zhǔn)品)

抗絲聚蛋白(AFA)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)辛標(biāo)準(zhǔn)溶液(100μg/ml,u=4%)

抗利尿激素(ADH)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)辛標(biāo)準(zhǔn)溶液(10μg/ml,u=6%)

抗卵巢抗體(AOAb)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000μg/ml,溶:醇)

抗Ⅱ型膠原蛋白抗體(Anti-CⅡAb)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)標(biāo)準(zhǔn)溶液(10μg/ml,u=4%)

153kDa核孔蛋白(NUP153)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)吡嘧磺隆(分析標(biāo)準(zhǔn)品,99%)

絲裂原激活蛋白激酶激酶激酶1(MAP3K1)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)草胺(分析標(biāo)準(zhǔn)品,97.5%)

抗OJ抗體(Anti-OJ)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)草胺標(biāo)準(zhǔn)溶液(10μg/ml,u=2%)

抗組蛋白抗體(AHA)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)殘殺威標(biāo)準(zhǔn)溶液(10μg/ml,u=4%)

脂酶A1(PLA1)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)莠定(分析標(biāo)準(zhǔn)品,98.5%)

133kDa核孔蛋白(NUP133)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)嘧霉胺(分析標(biāo)準(zhǔn)品,98.5%)

纖維蛋白原α(FGα)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)甜菜寧(分析標(biāo)準(zhǔn)品,99%)

絲裂原激活蛋白激酶8(MAPK8)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)霜靈標(biāo)準(zhǔn)溶液(10μg/ml,u=6%)

 


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